2. Universidad Cardenal Herrera-CEU

Las prostaglandinas (PGE2 y PGF2α) ejercen un rol esencial en el proceso de la ovulación en los mamíferos. El objetivo de este experimento fue determinar si la inyección intrafolicular con prostaglandina F2 alfa (PGF2α) administrada en el período preovulatorio inducía la ovulación normal y formación del cuerpo lúteo, confirmado más tarde con la presencia de una vesícula embrionaria. Se utilizaron 6 yeguas mestizas en dos ciclos estrales cada una, con un diseño crossover. El tracto reproductivo de las yeguas fue ecografiado cada 24 h desde el día 15 del ciclo (Día 0 = día de la ovulación) hasta el momento de la punción folicular (Hora 0). La punción ecoguiada del folículo preovulatorio (diámetro ≥ 35mm y presencia de moderado edema uterino) se realizó a través del flanco, inyectando 750 μg de PGF2α diluido en 0,5 ml de agua estéril (grupo tratado n=6) o placebo (0,5 ml de agua de inyección) (grupo control n=6). Previo a la punción, las yeguas fueron inseminadas con semen fresco. Se obtuvieron imágenes ultrasonográficas cada 12 h del folículo punzado y se tomaron muestras de sangre cada 48 h de la vena yugular para determinar los niveles plasmáticos de progesterona. Cinco de las seis yeguas (83%) del grupo tratado, tuvieron fallas en la ovulación y sólo una de las yeguas ovuló pero no se obtuvo preñez. De acuerdo con estos resultados, la inyección intrafolicular con PGF2α no permitiría la ovulación normal y, contrariamente a lo esperado, induciría la formación de folículos hemorrágicos anovulatorios. Además, se observó un retraso en la elevación de progesterona en la única yegua que ovuló. / Prostaglandins (PGE2 and PGF2α) play an essential role in the ovulation process in mammals. The objective of this experiment was to determine whether intrafolicular injection with prostaglandin F2 alpha (PGF2α) administered in the pre-ovulation period induced normal ovulation and corpus luteum formation, it was later confirmed with the presence of an embryonic vesicle. Six mixedbreed mares were used in two estrous cycles each, with a crossover design. The ultrasonographic examination of the reproductive tract was performed every 24 hours from day 15 of the cycle (Day 0 = day of ovulation) until the time of follicular puncture (Hour 0). The ultrasound guided puncture of the preovulatory follicle (diameter ≥ 35 mm and presence of moderate uterine edema) was performed through the flank, injecting 750 μg of PGF2α diluted in 0.5 ml of sterile water (treated group n = 6) or placebo (0.5 ml of injection water) (control group n = 6). Prior to puncture, the mares were inseminated with fresh semen. Ultrasound images were obtained every 12 h of the punctured follicle and blood samples were taken every 48 h from the jugular vein to determine plasma progesterone levels. Five of the six mares (83%) of the treated group had ovulation failures and only one of the mares ovulated but no pregnancy was obtained. According to these results, intrafolicular injection with PGF2α at the concentration used would not allow normal ovulation and contrary to expectations would induce the formation of anovulatory hemorrhagic follicles. In addition, a delay in progesterone rise was observed in the only mare that ovulated.

Sheep estrous synchronization is mainly based on progestagen-impregnated sponges which could cause vaginitis. Several species of Lactobacillus used as probiotics are commonly used in the treatment or prevention of urogenital infections in humans. However, no studies have been performed to analyze the potential use of probiotics to prevent urogenital infections in sheep. A randomized controlled clinical trial was conducted with 21 one-year-old ewes to develop a model of probiotic infusion in vaginal sponges in order to study their influence in ewe’s vaginal microbiota, general health status, fertility and prolificity. Synchronization of estrus was based on intravaginal sponges for 14 days. Bacterial communities (Enterobacteriaceae and lactic acid bacteria) were highly fluctuating over time and between animals. The safety of probiotic infusion (mix of Lactobacillus spp. 60% L. crispatus, 20% L. brevis and 20% L. gasseri) in the vagina of healthy ewes was firstly confirmed. Neutrophils were observed in 80% (8/10) of the control ewes compared to 36% (4/11) of the ewes in the probiotic group 2 days after sponge removal (p = 0.056). Fertility in the control and probiotic groups was 60% (6/10) and 91% (10/11), respectively p = 0.097. These results suggest that Lactobacillus spp. infusion in the ewe’s vagina does not affect general health status or fertility.

Lactic acid bacteria (LAB) dominate human vaginal microbiota and inhibit pathogen proliferation. In other mammals, LAB do not dominate vaginal microbiota, however shifts of dominant microorganisms occur during ovarian cycle. The study objectives were to characterize equine vaginal microbiota in mares by culture-dependent and independent methods and to describe its variation in estrus and diestrus. Vaginal swabs from 8 healthy adult Arabian mares were obtained in estrus and diestrus. For culture-dependent processing, bacteria were isolated on Columbia blood agar (BA) and Man Rogosa Sharpe (MRS) agar. LAB comprised only 2% of total bacterial isolates and were not related to ovarian phases. For culture-independent processing, V3/V4 variable regions of the 16S ribosomal RNA gene were amplified and sequenced using Illumina Miseq. The diversity and composition of the vaginal microbiota did not change during the estrous cycle. Core equine vaginal microbiome consisted of Firmicutes, Bacteroidetes, Proteobacteria and Actinobacteria at the phylum level. At the genus level it was defined by Porphyromonas, Campylobacter, Arcanobacterium, Corynebacterium, Streptococcus, Fusobacterium, uncultured Kiritimatiaellae and Akkermansia. Lactobacillus comprised only 0.18% of the taxonomic composition in estrus and 0.37% in diestrus. No di erences in the relative abundance of the most abundant phylum or genera were observed between estrus and diestrus samples.

Los folículos hemorrágicos anovulatorios (HAF) son la patología anovulatoria más común en yeguas. Dicha condición es comparable a la que padecen las mujeres (folículos luteinizados anovulatorios), siendo una causa importante de infertilidad en medicina humana. La causa exacta por la que se producen estos folículos es todavía una incógnita, pero son muchos los factores que influyen en la inhibición de la ruptura folicular. Estudios en yeguas y en otras especies han demostrado que la inhibición de la síntesis de prostaglandinas (PG) mediante administración de antiinflamatorios no esteroideos (AINEs) en el periodo periovulatorio ha producido un alto porcentaje de folículos luteinizados anovulatorios. De forma fisiológica es la hormona luteinizante (LH) la que inicia la cascada de eventos que tienen como fin la ovulación, entre los cuales está la síntesis de PG dentro del folículo preovulatorio. Otro elemento que parece estar implicado en la formación de HAF son los niveles altos de prolactina como se ha demostrado en otras especies como la rata y el conejo. Un estudio reciente obtuvo resultados similares de producción de folículos luteinizados anovulatorios en yeguas mediante la administración de sulpirida, un antagonista de la dopamina que eleva la prolactina. El objetivo de esta tesis doctoral fue valorar el efecto de la prolactina y las prostaglandinas E2 y F2α sobre la ovulación y fertilidad en la yegua. La administración de sulpirida durante el periodo periovulatorio produjo un aumento de las concentraciones plasmáticas de prolactina. Sin embargo, esta hiperprolactinemia no tuvo ningún efecto sobre la ovulación ni sobre la formación de folículos hemorrágicos anovulatorios. En yeguas tratadas con AINEs en el periodo periovulatorio, la administración intrafolicular de PGE2 y PGF2α restableció la ovulación dentro de las 12 h tras la inyección, evitando la formación de folículos luteinizados anovulatorios. Además, supuso la correcta liberación y fertilización del ovocito, ya que las yeguas quedaron gestantes. Este mismo protocolo se empleó en yeguas al inicio del estro. En la mayoría de las yeguas se produjo el colapso folicular dentro de las 12 h siguientes a la administración del tratamiento. Esta fase del estudio reafirma el papel de las prostaglandinas en el proceso de ruptura de la pared y colapso folicular y sugiere que este hecho puede suceder incluso antes de la última fase de la onda preovulatoria de LH.