Estudio de marcadores de daño muscular en saliva humana y de perro : un caso de One Health

Abstract

El uso de la saliva como medio diagnóstico es cada vez más frecuente. De hecho, se ha podido constatar dicha utilidad en la detección de diversas sustancias, así como en el diagnóstico de algunas enfermedades. Por su parte, el daño muscular conlleva el incremento en sangre de ciertas enzimas, como CK, AST y LDH. El objetivo de la presente tesis doctoral es comprobar que la saliva puede usarse para detectar el daño muscular. Y de forma paralela evaluar cómo afectan diferentes condiciones de colección, procesado y almacenamiento de muestras de saliva sobre las enzimas de daño muscular. Para llevar a cabo tal objetivo se plantearon 4 estudios relacionados entre sí. En el primero de ellos se analizaron las variaciones enzimáticas que había entre las muestras de saliva sin tratar, las centrifugadas y las centrifugadas con algodón; a su vez se estudiaron diferentes métodos de centrifugación, con diferentes tiempos y fuerzas. En el segundo estudio, se analizaron las variaciones enzimáticas que había en las muestras de saliva al someterlas a diferentes condiciones de almacenamiento en el tiempo: a temperatura ambiente, refrigeración, a -20°C y a -80°C. Por otro lado, también se evaluó la estabilidad enzimática tras varios ciclos de congelación y descongelación a -20°C y a -80°C. En el tercer lugar, se recurrió a un modelo animal de daño muscular, ovariohisterectomía por el flanco en perro, en el que se midieron los valores de las enzimas CK y AST en suero y saliva, antes y después de la cirugía. Por último, el cuarto estudio midió los valores enzimáticos de CK, AST y LDH en jugadores de futbol sala, antes y después (varios tiempos) del partido, en suero y en saliva. Tras el análisis de los resultados se llegó a las siguientes conclusiones. En el primer estudio se llegó a la conclusión de que la centrifugación de las muestras de saliva mejora altamente la precisión de los análisis. En el segundo a que el método de conservación más apropiado es a -80°C. Finalmente, el tercer y cuarto estudios ponen de manifiesto que las enzimas estudiadas se incrementan tras un evento que implica un daño muscular. En definitiva, la saliva se configura como un buen medio diagnóstico para el daño muscular, con gran potencial clínico a desarrollar. / The use of saliva as a diagnostic medium is increasing during last years. In fact it has been possible to verify this utility in the detection of various substances and in the diagnosis of some diseases. On the other hand, muscle damage increases blood levels of certain enzymes such as CK, AST and LDH. The aim of this Thesis was to know if saliva could be used to detect muscle damage. And also, evaluate how the different conditions of collection, processing and storage of saliva samples affect to the studied enzymes. To achieve this objective 4 studies were performed in saliva. In the first study the enzymatic variations between the saliva untreated samples, the centrifuged samples and the centrifuged samples with cotton were analyzed and, also different methods of centrifugation were studied with different times and forces. In the second study the stability of the studied enzymes under different storage conditions were analyzed. Concretely at room temperature, under refrigeration, at -20°C and -80°C. On the other hand the enzymatic stability was evaluated after several cycles of freezing and thawing at -20°C and at -80°C. In the third study CK and AST enzymes were measured in serum and saliva before and after an ovariohysterectomy. Finally, in the fourth study CK AST and LDH were measured in serum and in saliva in soccer players before and after the match. After the analysis of the results the following conclusions were (1) the centrifugation of the saliva samples improves highly the precision of the analysis, (2) the best conservation method is at -80°C. Finally, the third and the fourth studies shown that the enzymes studied increased after an event involving muscle damage. In conclusion saliva is configured as a good diagnostic medium for muscle damage with great clinical potential to be developed.