4. CEU Escuela Internacional de Doctorado (CEINDO)

El mieloma múltiple (MM) es una neoplasia hematológica muy común, caracterizada por la proliferación excesiva de células plasmáticas diferenciadas a partir de linfocitos B en el interior de la médula ósea. Esta enfermedad presenta diferentes etapas en las que evoluciona desde periodos tempranos asintomáticos hasta la manifestación de síntomas clínicos típicos del MM. A pesar de que actualmente existen diversos tratamientos para el MM, es frecuente la aparición de recaídas, siendo la tasa relativa de supervivencia a 5 años es del 50%. Esto implica que, a pesar de los avances científicos de los últimos años, la enfermedad sigue considerándose incurable, por lo que es necesario conocer con mayor profundidad los mecanismos celulares que intervienen tanto en el desarrollo de la enfermedad como en la aparición de resistencias al tratamiento. El objetivo de este trabajo es estudiar el papel de Rnd3 en el MM. Rnd3 es una proteína Rho atípica incluida dentro de la subfamilia Rnd. Las proteínas Rho están clásicamente implicadas en la reorganización del citoesqueleto de actina y han sido ampliamente relacionadas con procesos de transformación celular, destacando su implicación en la proliferación y la migración de las células tumorales. En el caso concreto de Rnd3 también existen evidencias que la relacionan con la progresión tumoral, aunque su función oncogénica u oncosupresora es dependiente del tipo celular y tumoral. Datos previos indican un incremento de la expresión de RND3 en muestras de MM procedentes de modelos murinos que mimetizan la enfermedad humana, así como también en células plasmáticas procedentes de pacientes con MM respecto a células plasmáticas sanas. Para profundizar en el papel de Rnd3 en el MM hemos generado dos líneas celulares de MM (RPMI 8226 y JJN3) deficientes en Rnd3, y hemos analizado su efecto en los procesos de proliferación, adhesión celular y sensibilidad a fármacos. Por otro lado, hemos realizado un estudio transcriptómico para determinar el papel de Rnd3 en la regulación de la expresión de genes implicados en MM. Como resultado destaca la expresión diferencial del gen que codifica para una quimiocina, CXCL10, que se encuentra implicada en la migración de las células del sistema inmuntario y que recientemente se ha relacionado con fenómenos de inmunoterapia e inmunovigilancia en diferentes tumores. Finalmente, hemos validado estos resultados en células deficientes en Rnd3 observando un incremento en la expresión de esta quimiocina, tanto a nivel de mRNA como de expresión proteica. Así pues, estos resultados indican un papel inhibidor de Rnd3 sobre la expresión de CXCL10. Sin embargo, esto no tiene un efecto sobre las propias células tumorales, sugiriendo un papel paracrino de CXCL10 sobre el microambiente tumoral y sobre el sistema inmunitario. En conjunto, este trabajo sugiriere un nuevo papel de Rnd3 en la regulación de la expresión de CXCL10 y su posible papel en la patología del MM.

Autofagia es el proceso por el cual se media el direccionamiento de material citoplasmático (proteínas y orgánulos) hacia los lisosomas para su posterior degradación. Su correcto funcionamiento es clave para mantener la homeostasis celular y controlar los niveles y la calidad de los constituyentes intracelulares, contribuyendo a la obtención de energía y permitiendo la adaptación de la célula a condiciones de estrés. Se ha descrito que un mal funcionamiento en el proceso de autofagia está relacionado con numerosas enfermedades neurodegenerativas (Parkinson, Alzhéimer o esclerosis lateral amiotrófica), siendo una característica común la presencia de agregados proteicos u orgánulos disfuncionales, que, en parte, acaban explicando la aparición de los distintos síntomas clínicos. Las proteínas Rho, implicadas en la regulación de la dinámica del citoesqueleto de actina, juegan un papel clave en el desarrollo y función del sistema nervioso central. Rnd3/RhoE es un miembro de la subfamilia Rnd y se caracteriza por estar constitutivamente activada. Su función en migración, proliferación y supervivencia celular ha sido ampliamente estudiada. Rnd3 es necesario para el correcto desarrollo y funcionamiento del SNC. En nuestro grupo, la utilización de un modelo de ratón genéticamente modificado (Rnd3gt/gt) ha demostrado que la ausencia de esta proteína produce graves alteraciones motoras y de desarrollo neural, destacando la presencia de agregados proteicos y mitocondrias morfológicamente aberrantes en neuronas, un fenotipo compatible con problemas en el proceso de autofagia, tal y como se ha descrito en algunas patologías neurodegenerativas. En este estudio nos planteamos analizar el posible papel de Rnd3 en autofagia, con el objetivo de poder entender alguno de los fenotipos que aparecen en el modelo murino deficiente en esta proteína. Nuestros resultados demuestran que la ausencia de Rnd3 aumenta la tasa de degradación proteica y provoca un aumento en autofagia en condiciones basales, sugiriendo que Rnd3 es un regulador negativo de este proceso, actuando a nivel de la maduración del autofagosoma. Además, hemos demostrado un nuevo papel de Rnd3 en la homeostasis mitocondrial. La presencia de mitocondrias no funcionales en células deficientes para Rnd3 provoca una alteración del metabolismo oxidativo y una activación de la glucólisis como mecanismo alternativo para la obtención de energía. Todos estos resultados muestran un nuevo papel de Rnd3 en la regulación de autofagia, así como en la homeostasis mitocondrial, lo que podría explicar algunos de los fenotipos observados en el modelo de ratón deficiente para Rnd3. / Autophagy is the cellular process by which lysosomes contribute to the degradation of intracellular components, including proteins and organelles. The correct function of this catabolic process is necessary for cell homeostasis and controls the levels and quality of intracellular constituents, not only contributing to obtaining energy but also allowing cells to adapt to stress conditions. It has been described that an alteration in the autophagy process is related to numerous neurodegenerative diseases (Parkinson's, Alzheimer's or amyotrophic lateral sclerosis). Moreover, autophagy malfunction leads to protein aggregates and dysfunctional organelles accumulation that can explain some of the clinical symptoms. Rho proteins are involved in the regulation of the actin cytoskeleton dynamics and also have been postulated to play a key role in the development and function of the Central Nervous System. Rnd3/RhoE is a member of the Rnd subfamily, being constitutively activated. Its role in cell migration, proliferation and survival has been extensively studied. Rnd3 is necessary for the correct development and function of the CNS. In our group, the use of a genetically modified mouse model (Rnd3gt/gt) revealed that the lack of this protein produces serious motor and neural development alterations. Moreover, Rnd3 deficient neurons show protein aggregates and aberrant mitochondria, a phenotype compatible with problems in autophagy, as also described in some neurodegenerative pathologies. In this study we sought to analyze the possible role of Rnd3 in autophagy, in order to understand some of the phenotypes that appear in the Rnd3 deficient murine model. Our results demonstrate that the absence of Rnd3 promotes higher protein degradation rates and increased levels of autophagy even in basal conditions, suggesting that Rnd3 negatively regulates this process, at the level of the autophagosome maturation. In addition, we have demonstrated a new role of Rnd3 in mitochondrial homeostasis. The presence of nonfunctional mitochondria in Rnd3-deficient cells causes an alteration in the oxidative metabolism and an activation of glycolysis as an alternative mechanism to obtain energy. Altogether, these results highlight a new role of Rnd3 in the regulation of autophagy and mitochondrial homeostasis, which could explain some of the phenotypes observed in the Rnd3gt/gt mouse model.